����¯�¿�½������°������³����¯�¿�½����¯�¿�½������·������º������°...

Сімейство CORONAVIRIDAE: Інфекційний перитоніт кішок – Реферати з ветеринарії

Коронавіруси – РНК-віруси, що мають ліпопротеїнову оболонку. Коро навіруси містять плюс-ланцюга РНК і володіють унікальним механізмом реплікації. У них відсутня нейрамінідазнойактивність і вони не зв’язуються з рецепторами, содер] жащімі сіалова кислоту.

Структура

Вірусний геном являє собою 1-цепочечную РНК (плюс-ланцюг), довжиною від 16 до 21 нм мол.м. 6,5-11 мД. Як і у випадку інших вірусів, що містять плюс-ланцюга РНК, ге] автономних РНК коронавірусів инфекционна при введенні в клітину еукаріот. Молекули ос] новного фосфопротеинов N (50-80 кД), взаємодіючи з геномної РНК, утворюють гнучкий, протяжний нуклеокапсид, що володіє спіральною симетрією. Залежно від площини перерізу на тонких зрізах віріонів такі спиралеподібні нуклеокапсиди видно у вигляді «бублика» або трубчастої нитки діаметром 9-11 нм. Нуклеокапсид оточений липопротеиновой оболонкою, що формується з шорсткого ендоплазматіче ського ретикулума (ЕР) або апарату Гольджі заражених клітин. Оболонка зі] варто з ліпідного бішару, що включає 2 вірусних глікопротеїну Е (матриксний Е1) і пепломерний (Е2) глікопротеїн.

матриксного глікопротеїн Е1 (20-30 Кд) є трансмембраним білком, глибоко занурений в оболонку, не переноситься на плазматичну мембрану. Він накопичується в ап] Параті Гольджі, де відбувається брунькування коронавирусов. AT до El нейтралізують інфекційність вірусних частинок тільки в присутності комплементу. Глікопротеїн Е2 (180-200 кД) нагадує глікопротеїни великих вірусів, що містять мінус-ланцюга РНК: в ліпідний бішар занурена тільки невелика частина молекули глікопротеїну, тоді як більша частина молекули знаходиться зовні. Глікопротеїн Е2 є структурним бел] ком пепломеров і тому відіграє роль антірецептора, за допомогою якого вірусна годину] Тіца прикріплюється до рецепторів на поверхні клітини. AT до Е2 нейтралізують инфекци] онность вірусу, а присутність Е2 на плазматичній мембрані робить заражені коронавірусів клітини сприйнятливими до цитотоксичних лімфоцитів. Розщеплення гли] копротеіна Е2 протеазами клітини господаря на 2 поліпептиду з мол.м. по 90 кД індукує здатність вірусу викликати злиття клітин. Як і в інших вірусів з плюс-ланцюгом РНК, в вирионе коронавирусов немає РНК-залежної РНК-полімерази.

Більшість коронавирусов володіє значною тропностью до клітин епітелію дихальних шляхів і кишкового тракту. Характерно, що кишкові коронавіруси викли] ють слабкі, непомітно протікають інфекції у дорослих особин і важкі, супроводжую] щіеся проносом захворювання у новонароджених і молодих тварин. Багато коронаві] руси викликають персистентную інфекцію in vivo .

Антигенна варіабельність і спорідненість. Є 4 групи коронавирусов, разли чающіхся за своїми АГ-властивостям. Усередині кожної групи вірусів мають місце постійні АГ перехрещення, однак, віруси однієї групи легко розрізняються за спе] ціфічності до господаря і клінічним синдромом.

Культивування. У культурі клітин коронавіруси мають латентний період від 6 до 7 ч. При інфікуванні культури клітин вірулентними коронавірусами клітини можуть слі] тися, утворюючи синцитій, або лізуватись. У деяких клітинних культурах, заражений] них коронавірусів людини (HCV -22 gE), вірусні частки утворюються в течію не скількох тижнів, але загибелі клітин і цитопатичної ефекту не спостерігається. Багато коронавіруси викликають персистентную інфекцію in vivo . Одним з факторів, здатних перетворювати абортивні Коронавірусние інфекції в пермісивними вірулентні, є трипсин. Для продукування вірусу і досягнення ЦПЕ в культуральну середу, заражену коронавірусів ВРХ, необхідно додавати тріп] сін. Цей коронавірус зазвичай реплицируется в кишечнику, де присутня тріп] сін, який сприяє розщепленню полімерного глікопротеїну Е2.

  Нежить. - Здоров'я - від трьох до шести років - 1699725 -

Реплікація. Коронавіруси володіють деякими унікальними особливостями в транскрипції РНК, складі білків і механізмі збірки. Вони проникають у клітину за допомогою абсорбційного ендоцитозу. Після чого відбувається прикріплення геномної РНК до рибосом] мам, що призводить до синтезу вірусної РНК-залежної РНК-полімерази. При транскрипції геномної РНК утворюється комплементарна мінус-ланцюг РНК повної довжини. Синтез її за] вершается через 5-6 год після зараження. Мінус-ланцюг РНК служить матрицею для синтезу як нових геномних, так і субгеномних РНК. Синтез глікопротеїнів Е1 і Е2 відбувається на полісомах, прикріплених до ендоплазматичнийретикулум, проте в процесі їх транскрипції є відмінності. В апараті Гольджі або на плазматичній мембрані Е2 розщеплюється протеазами клітини-господаря на 2 великих глікопептидами (90 кД). Таке расще] полоні необхідно для прояву інфекційності вірусу. Глікопротеїн Е1 також синте] зіруется на полісомах, пов’язаних з мембранами. Дивно, що олігосахарідним зі] ставши Е1 у різних коронавирусов сильно розрізняється.

Збірка віріонів. Спіральний нуклеокапсид коронавирусов утворюється в цитоплазмі заражених клітин за рахунок взаємодії знову синтезованої РНК з молекулами білка N. Розміри нуклеокапсида, мабуть, визначаються властивостями білка N, його здатне] стю до зв’язування.

Віріони коронавирусов утворюються шляхом брунькування від мембрани Шер і (або) аппа] рата Гольджі. Брунькування коронавирусов відбувається тільки на тих внутрішньоклітинних мембранах, на яких локалізовані молекули Е1. Віріони утворюються на мембранах Шер та апараті Гольджі. Здатність коронавирусов виходити з клітки без її лізису є важливим фактором, що забезпечує можливість помірної (Не Цитопатична) інфекції.

Віріони коронавирусов представляють собою сферичні або плеоморфние частинки діаметром 60-200 нм. Вони складаються з нуклеокапсида спіральної симетрії і ліпопротеі идной оболонки, на поверхні якої є булавоподібні виступи довжиною 12-24 нм, що утворюють подобу сонячної корони. Плавуча щільність віріонів в сахарозе 1,15-1,18 г / см 3. Віріони чутливі до жірорастворітелей і детергентів. У складі віріонів виявлено 3-4 білка з мол.м. 18-220 кД. У інфікованих клітинах виявлено 5-7 видів субгеномних РНК, які містять унікальні послідовності на 5 ‘- кінці. Всі вони кепіровани і поліаденіліровани. Кожна субгеномная РНК забезпечує синтез толь] ко одного білка, розмір якого відповідає кодує потенціалу 5’-кінцевий по] Отже, відсутність в більш короткій субгеномной РНК. Дозрівання віріонів відбувається брунькуванням через мембрани ЕПР та апарату Гольджі.

1. Рід Coronavirus . Основним структурним білком коронавирусов є нуклеоті ідний білок (N), мембранний гликопротеид (МЕ1) і спайковий (отростчатой) глікопро теід (S, E 2). Крім цих білків, притаманних усім Коронавіруси, у коронавирусов людини і ВРХ виявлений додатковий гликопротеид (gp 65), який не пов’язаний ні з S, ні з N поліпептидами. У прототипного штаму коронавірусу людини ОС43 і коронавірусу, ви зувати діарею у новонароджених телят, є загальні АГ-детермінанти, що уста] новлено в РН, РСК і підтверджено виявленням сероконверсії у осіб з коронавирусной інфекцією, причому для шт. ОС43 і NCDCV (коронавірусу телят) вони більш близькі за внутрішнім, ніж по поверхневим АГ.

  Годування Чихуахуа і Тієї тер'єра, маленьких декоративних собак

2. Рід Torovirus (від лат. torus < / em> – тор) включає віруси Берні (прототипний вірус) і Бреда. Віріони торовірусов являють собою плеоморфние частинки, (у вигляді напівміст] ца, двояковогнутого диска, округлі) діаметром 120-140 нм. Вони складаються з тороїдального нуклеокапсида спіральної симетрії і липопротеидной оболонки.

Геном складається приблизно з 20 тис. нуклеотидів. У вирионах виявлений нуклеокап Сідней фосфопротеїн N (18-20 кД), матриксний фосфопротеїн М (37 кД). МонАТ до пепломерному білку нейтралізують інфекційну і ГА активність вірусу. Торовіруси пере] даються фекально-оральним шляхом і викликають, в основному, ураження кишечника у лоша дей, ВРХ і людини. Серологічними дослідженнями показана широка циркуляція то] ровірусов у свиней, овець, кіз, кроликів і диких мишей. Між торовірусамі коней, ВРХ і людини мається АГ спорідненість.

Перший коронавірус кішок (збудник інфекційного перитоніту) проявляє антигенну спорідненість з коронавірусів собак, тоді як другий коронавірус кішок FICV (збудник ентериту кішок) відмінний від вірусу інфекційного перитоніту (FIPV) і не має спорідненості з коронавірусами собак. Патогенність двох варіантів вірусу досить чітко розрізняється. Так, відомі дві групи коронавирусов кішок, які дуже близькі за біологічними і біохімічними властивостями, але різко розрізняються за патогенності in vivo. ентеропатогенну коронавіруси кішок (FeCV) вражають епітелій кишечника і викликає у молодих тварин легко про] тека, але висококонтагіозна ентерити. У перехворілих кішок розвивається імунна] тет, але іноді спостерігається персистенція збудника. Іншу групу складають штами FIPV, що викликають важкий перитоніт, як прави] ло, з летальним результатом, у кішок у віці від 6 місяців до 2 років. Крім ентероцитів ці ві] руси вражають макрофаги. АТ до вірусу не створюють стійкість, навіть погіршують перебіг хвороби. Характерним є розвиток васкуліту. За титром АТ не можна з достовірністю диференціювати обидві форми коронавирусной інфекції.

Антигенна активність характеризується наступними даними. Інфіковані кіш] ки на підставі імунної відповіді і клінічних ознак поділяються на 3 групи. У 1-й, найчисленнішою, у кішок реєстрували титри АТ 1:160 – 1:10000 при відсутність про] відно клінічних ознак. Серед цієї групи спорадично виявлялися кішки (група 2), у яких спостерігали швидке збільшення титрів АТ і розвиток клінічних ознак з подальшою загибеллю. Кішки 3-ї групи тривалий час виглядали здоровими, титри АТ у них поступово досягали плато, потім у них виявляли параліч задніх кінцівок, зниження титрів АТ і загибель.

В експериментальних умовах інфекція легко відтворюється через 24 годин після зараження збудник локалізувався в мигдалинах і тонкому кишечнику, а надалі інфекція поширювалася на сліпу і ободову кишки, мезентеріальні лімфовузли і печінку. Вірус вдавалося виявити в змивах з ротоглотки і у фекаліях, починаючи з 2-4 і 3-5 дн після зараження відповідно і протягом 14 дн спостереження. Патологоанатомічні зміни мигдалин інфікованих кішок характеризувалися інфільтрацією поліморфнонуклеарних нейтрофілів і макрофагів, ексудативними процесами.

Зростання кишкового коронавірусу кішок, шт.79-1683, в клітинах ембріона кішок інгібується у присутності 1 мкг / мл актиноміцину О. У цих культурах не утворюється вірусспеціфічная мРНК, а врожай інфекційного вірусу зменшується більш ніж в 100 разів. На відміну від цього, розмноження антігеннородственного вірусу ІПК, шт.79-1146, не залежить від при] сутствия актиноміцину. Таким чином, фундаментальна відмінність між цими коронавірусами кішок полягає в їх різної залежності від функцій, кодованих господарем.

Виявлено цікава залежність між вірулентністю коронавирусов кішок і клітинним тропизмом, вірулентні штами, в основному, вражають моноцити, авірулентние – реплікуються в епітелії кишечника. Вірус проникає через слизові оболонки респіраторного та шлунково-кишкового тракту, потрапляє в кров і вражає макрофаги. На патологічний про] цес протікає за участю вірусних АТ, тому створення вакцини складно. Убиті вакци] ни лише підвищують чутливість до інфекції. Неефективні і живі вакцини.

Запропоновано реакції РЗГА і РН. Крім того, розроблено конкурентний метод Е LISA для визначення АТ до вірусу перитоніту кішок. Для цього отримані і випробувані монАТ до трьох мажорним вірусним компонентами: глікопротеїну і протеїну пепломера. Поклади] тельно реагуючих в конкурентному ЕИ8А 98,5% проб сироваток мали АТ до капсидного протеїну і 4,8% – до протеїну пепломера.

Запропоновано вакцина. Біомасу вірусу отримують шляхом культивування клітин селезінки інфікованих тварин у суспензійних умовах. Вакцина проти інфекційного перитоніту котів розроблена на основі температурно-чутливого мутанта виру] са. При інтраназальному введенні її вірус реплікується тільки у верхніх дихальних шляхах і інактивується в інших органах. При випробуванні його на кішках в експери] них умовах з 20 вакцинованих тварин після контрольного зараження захворіло 3, а в групі невакцинованих – всі 12, з них загинуло 10. У вакцинованих кішок обра] зовались сироваткові і секреторні ВНА, а також розвинувся клітинну імунну відповідь. Польові випробування підтвердили безпечність та ефективність вакцинації. В Англії застосовується жива вакцина Primucell IPV з ts-мутанта FI PV шт.DF -2. Її вводять в ніс. Ре] комендуется імунізувати кошенят у віці 16 тижнів і через 3-4 тижнів.

Зазначений метод типування штамів заснований на ампліфіцірованіі фрагмента кДНК вірусу величиною 400 пар основ з N-термінальної області 52 глікопротеїнового гена, який обробляють рестріктазного ферментами і визначають довжину фрагментів шляхом електрофорезу в ПААГ. Фрагменти різних штамів вірусу порівнюють між собою. Різниця їх АГ структури підтверджено в РН.